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抓力-加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

山东医药 2016 年第 56 卷第 41

 

加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

刘晓婷1,,陈维达3 ,陈泽涛3 ,王海涛2

( 1 山东中医药大学,济南 250014; 2 潍坊市中医院; 3 山东省中医院)

 

摘要: 目的     探讨加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响。方法     选取 SPF 级雄性 SD 大 90 只,分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组 5  组,每组大鼠 16  只。采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) ,于造模成功后 24 h 假手术组与模型组灌胃生理盐水,中药高剂量组、中药低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1 92、0 96  g / ( kg·d) ,西药组灌胃吡拉西坦片 0 5  g / ( kg·d) ,灌胃容积为 10  mL / kg; 1 次/ d,连续给药 7  d。各组于**开始前及**结束 24  h 内进行神经行为学测试并记录,于给药周期结束 24 h 内,取脑组织切片、染色、拍照,计算各组梗死体积比及缺血侧大脑水肿度。结果 **后神经障碍评分及平衡木行走实验得分中药高剂量组、西药组与模型组比较明显减低( P 均  0 05) ,中药低剂量组*为显著P  0 01) ; 中药高剂量组、中药低剂量组、西药组较模型组自发活动次数明显增多( P 均  0 05) ,中药高剂量组*为显著( P  0 01) ,中药低剂量组及西药组亦明显增多( P  均  0 05 ) ,中药高、低剂量组与西药组比较,P  均 0 05; 中药高剂量组、中药低剂量组、西药组与模型组脑梗死体积相比均明显降低( P 均  0 01) ; 中药低剂量组、西药组缺血侧大脑水肿度明显降低( P 均  0 01) 。结论     加味涤痰汤灌胃对缺血再灌注损伤大鼠神经功能有?;ぷ饔?/span>,能提高受累肢体肌力、恢复精巧运动,减少脑梗死体积。

关键词: 脑缺血再灌注损伤; 加味涤痰汤; 中药; 神经?;? 大鼠

doi: 10. 3969 / j. issn. 1002-266X. 2016. 41. 010

中图分类号: 651 1 文献标志码: A 文章编号: 1002-266X( 2016) 41-0036-03


缺血性脑卒中是脑血管病中*常见的一种类型,约占全部脑血管病的 80% 。脑缺血一定时间恢复血液供应后,其功能不但未能恢复,却出现了更加 严重的脑功能障碍,称为脑缺血再灌注( CIR) 损伤1。缺血再灌注损伤是缺血性脑卒中导致神经功能障碍的主要病理基础,缺血性脑卒中属于中医 “中风”范畴,出自济生方的涤痰汤有涤痰开窍之功,是**急性期缺血性脑卒中的有效方剂。2015  2016  1 月,我们探讨了加味涤痰汤灌胃 CI 损伤大鼠神经功能的影响。

1 材料与方法

1 1 材料 雄性 SD  大鼠 90  只,SPF  级,体质 140  160  g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号 SCXK( 京) 2012-0001,质量合格证号 NO 011400700055671。2,3,5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 购于国药集团化学试剂有限公司; 苏木色精、  Y、甲苯胺蓝等试剂均为分析纯,购于国药集团化学试剂有限公司。实验仪器系统冠状切脑, 型号 68709,深圳瑞沃德公司; LEICA  M2245  切片

,LEICA  HI1220  烤片机,LEICA  XL  全自动染色机,OLYMPUS  BX51  生物显微镜; FED53  恒温干燥箱购自德国 Binder 公司; LEICA ASP200s 全自动全封闭脱水机,LEICAEG1150H 包埋机; 电热恒温鼓风干燥箱购自上海培因公司; 自发活动视频分析系统和大小鼠抓力测定仪,购自北京智鼠多宝生物科技有限责任公司。中药加味涤痰汤( 胆南星 12 g、石菖蒲、橘红、栀子、枳实各 10  g,半夏 9  g,水蛭、生大黄各 6 g) ,采用北京康仁堂药业全成分中药配方颗粒,每剂 9 6  g。西药吡拉西坦片( 0 4  g / 片) 购自山东仁和堂药业有限公司。

1 2    CI 损伤模型建立与分组    以 10% 水合氯醛按 3. 5  mL / kg 麻醉大鼠,按照 Clark  等[2]的方法,采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) 手术,缝合皮肤切口并**。假手术组除不插入线栓外过程相同。缺血 90 min 后拔出栓线进行再灌注[3],再灌注 90  min 时进行神经功能障碍评分,参照 Longa 等[4] 制定的标准进行评分,神经功能评分为1 ~ 3 分的MCAO 大鼠和0 分的假手术大鼠为本实验选用。实验共分为 5 组: 假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组,假手术组选用 0 分的假手术大鼠 16 只,其余 4 组随机选取造模成功大鼠各 16 只; 假手术组与模型组灌胃生理盐水,中药高、低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1. 92、0. 96  g / ( kg·d) ,西药组灌胃吡拉西坦片 0. 5  g / ( kg·d) ,灌胃容积为 10  mL / kg; 于造模成功后24 h 给药,1 次/ d,连续给药7 d,固体饲料和水自由摄取。

1 3    神经行为学测试    各组于**开始前及**结束 24 h 内进行神经行为学测试并记录。①神经功能障碍评分: 参照 Longa 等4 制定的标准进行评分。②平衡木行走实验5: 测定大鼠运动整合及协调能力,术前周每天早晚各训练 1 次,每次 10 min,使其能顺利在平横木上行走。平衡木长 80 cm、宽 2 5  cm,平放在距离地面高 10  cm 处,参考 Feeney 的计分标准。③自发活动次数和抓力: 将每只大鼠单独置于暗室之中,采用自发活动视频分析 系统记录 10  min 中内的自发活动次数,并用抓力测定仪对大鼠逐一进行抓力测试。术前 1 周每天早晚各训练 1 次,使大鼠适应暗室及对抓力板抓握。④ 脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度: 各组给药周期结束 24  h 内进行神经行为学测试后将大鼠断头取脑,取用的脑组织置于冰浴中迅速切片,切片厚度 3 mm,37  ℃ 避光 TTC 染色约 30  min,取出脑片,拍照,用 Image-Pro Plus 6. 0 软件处理图片,计算各组梗死体积比 同时计算缺血侧大脑水肿度 。

1 4    统计学方法    采用 SPSS17 0 统计软件。计量资料以 x± s 表示,多组间比较采用单因素方差分析,多个样本均数间的两两比较采用 LSD 法。P 0. 05 为差异有统计学意义。

2 1    各组**前后神经功能障碍评分、平衡木行走实验得分比较 见表 1。




2 2 各组**前后自发活动次数和抓力测量结果比较 见表 2。



2 3 各组**后脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度比较 见表 3。


3

       中医认为中风的发生与“风、、、、虚”密切相关。其中痰是人体水液代谢失常而形成的病理产物,是中风发生过程中重要的致病因素,并能影响**的发展、转归。现代研究表明,CI 损伤是一个多环节、多级联的病理生理过程,与自由基的过度形成、神经细胞内钙离子超载、兴奋性氨基酸的细胞毒作用、炎性反应和细胞凋亡等多种机制相关1。前研究应用的神经?;ぜ炼嗍钦攵?/span> CI 损伤中的某一个环节起效7,但由于 CI  损伤机制的复杂性,可能使用任何阻断单一环节的**疗效不佳。中药复方具有化学成分多样性、生物活性广泛性的 特性,在阻断 CI 损伤发**展中可从多靶点、多层次、多环节发挥作用。

      涤痰汤主治“中风痰迷心窍,舌强不能言”,临床对急性缺血性脑卒中的**有确切疗效8。 研究采用加味涤痰汤,方中半夏燥湿化痰,胆南星祛 风痰而止痉,共为君药; 橘红化痰**,枳实主降气、行痰湿,石菖蒲祛痰开窍; 栀子清热泻火,大黄泻热通便,水蛭**逐瘀通络; 诸药合用具有豁痰开窍、醒神通络的功效。本研究发现,中药高、低剂量组、西药组大鼠在用药周期结束后神经功能障碍评分、平衡木行走实验得分、10  min 内自发活动次数及抓力均较模型组有所改善,表明涤痰汤无论高、低剂量 均能有效改善 MCAO 大鼠神经功能,提高受累肢体肌力,恢复受累肢体精巧运动功能。从**应用剂 量上看,中药高、低剂量组均有明显神经?;ぷ饔?/span>, 两组比较差异无统计学意义,无明显的量效关系。中药高、低剂量组及西药组均能有效减少脑梗死体积,中药低剂量组、西药组缺血侧大脑水肿度明显降低,但中药高剂量组脑水肿度未见明显降低,这与神经行为学指标的改善并不完全一致。实验中往往以脑梗死体积的变化作为评估干预**药效的优选标准,但亦?;嵊心匀毖P投锏男形浠肽宰橹±砀谋浼淠岩哉业较喙氐牧?/span>9,可能与坏死周围水肿区神经细胞功能未完全丧失有关。

   本研究证实,加味涤痰汤灌胃对 CI 损伤大鼠神经功能有?;ぷ饔?/span>,能提高受累肢体肌力、恢复精巧运动、减少脑梗死体积。











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